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新品發(fā)布——水稻重組人轉(zhuǎn)鐵蛋白(禾創(chuàng)OsrhTF)
來(lái)源:禾元生物| 發(fā)布時(shí)間:2022-11-17| 點(diǎn)擊量:3846
一、轉(zhuǎn)鐵蛋白簡(jiǎn)介

轉(zhuǎn)鐵蛋白(Transferrin,TRF、TF)又稱(chēng)運(yùn)鐵蛋白,是在無(wú)脊椎動(dòng)物和脊椎動(dòng)物的生物液體中發(fā)現(xiàn)的糖蛋白,主要由肝臟制造,轉(zhuǎn)鐵蛋白是體內(nèi)最關(guān)鍵的鐵池,它是身體鐵狀態(tài)的重要生化標(biāo)志物。轉(zhuǎn)鐵蛋白由位于同源N-端和C-端的兩個(gè)葉片(Lobe)組成的一種單鏈糖蛋白。人轉(zhuǎn)鐵蛋白共含678個(gè)氨基酸殘基,等電點(diǎn)為5.9、分子量為76kD。每分子的轉(zhuǎn)鐵蛋白能攜帶2個(gè)三價(jià)鐵離子(Fe3+)。轉(zhuǎn)鐵蛋白與Fe3+的相互作用取決于pH,pH為7.4時(shí),轉(zhuǎn)鐵蛋白與Fe3+高效結(jié)合,在酸性pH下兩者分離。它一共有兩個(gè)鐵離子結(jié)合位,每個(gè)結(jié)合位可以與一個(gè)鐵離子結(jié)合。在羧基端(carboxyl terminal)的結(jié)合位與鐵離子有很高的親和力,只會(huì)與鐵離子結(jié)合。在氨基端的結(jié)合位則是可以與其他離子結(jié)合,親和力高低如下:鐵>鉻>錳>鎘>鎳。三價(jià)鐵離子與轉(zhuǎn)鐵蛋白的結(jié)合需要一個(gè)陰離子的存在,通常是碳酸氫鹽。與鐵離子結(jié)合的轉(zhuǎn)鐵蛋白稱(chēng)為飽和轉(zhuǎn)鐵蛋白或全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白(Holo-transferrin),未與鐵離子結(jié)合的轉(zhuǎn)鐵蛋白稱(chēng)為脫鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白(Apo-transferrin)。

轉(zhuǎn)鐵蛋白主要存在于血漿中,血漿中的轉(zhuǎn)鐵蛋白供應(yīng)機(jī)體絕大部分組織的鐵,而在其不能到達(dá)的部位,由這些組織自己合成的轉(zhuǎn)鐵蛋白在局部產(chǎn)生轉(zhuǎn)鐵作用,可自身合成轉(zhuǎn)鐵蛋白的其他組織和細(xì)胞還包括室管膜、少突膠質(zhì)細(xì)胞、轉(zhuǎn)移性黑色素瘤細(xì)胞系以及人乳腺癌細(xì)胞系[1]。轉(zhuǎn)鐵蛋白已在各種體液中檢測(cè)到,包括血漿、膽汁、羊水、腦脊液、淋巴和母乳。轉(zhuǎn)鐵蛋白的血漿濃度從出生起就穩(wěn)定,范圍為2g/L至3g/L,該蛋白的體內(nèi)半衰期為8天。轉(zhuǎn)鐵蛋白水平對(duì)于健康生長(zhǎng)非常重要,低于0.1g/L的水平與感染、生長(zhǎng)遲緩和貧血的發(fā)病率增加相關(guān)。

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二、轉(zhuǎn)鐵蛋白重要的代謝角色

? ? 鐵是幾種代謝途徑和生理過(guò)程的重要元素[1]。鐵穩(wěn)態(tài)的維持至關(guān)重要,因?yàn)樽兓瘯?huì)減少或過(guò)量對(duì)人體有害。鐵對(duì)所有生物都很重要。它在DNA復(fù)制中起著核心作用,其中一種關(guān)鍵酶是核糖核苷酸還原酶,需要鐵作為輔助因子。鐵還作為血紅素的輔助因子[2]。然而,游離鐵可能有毒,通過(guò)Fenton和Haber–Weiss反應(yīng)促進(jìn)自由基形成,從而導(dǎo)致組織氧化損傷。游離鐵通過(guò)將氫過(guò)氧化物轉(zhuǎn)化為反應(yīng)性過(guò)氧基和烷氧基而引起脂質(zhì)過(guò)氧化[3]。此外,TF促進(jìn)涉及碳水化合物醛基和蛋白質(zhì)氨基的自氧化反應(yīng),從而形成糖化產(chǎn)物。由于這些原因,鐵以氧化還原非活性形式運(yùn)輸是至關(guān)重要的。因此,TF的主要作用是將鐵安全地運(yùn)輸?shù)缴眢w周?chē)怨?yīng)生長(zhǎng)細(xì)胞。

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三、轉(zhuǎn)鐵蛋白的作用機(jī)理

? ? 轉(zhuǎn)鐵蛋白負(fù)責(zé)運(yùn)載由消化管吸收的鐵和由紅細(xì)胞降解釋放的鐵。以三價(jià)鐵復(fù)合物(TF-Fe3+)的形式進(jìn)入骨髓中,供成熟紅細(xì)胞的生成。轉(zhuǎn)鐵蛋白(TF)結(jié)合鐵是通過(guò)與其受體,即Transferrin Receptor 1(TFR1)相互作用而實(shí)現(xiàn)的。TFR1 是一種表達(dá)于細(xì)胞表面的糖蛋白,由兩個(gè)同源二聚體的亞基通過(guò)二硫鍵連接而成。在細(xì)胞表面,TF與Fe3+相互作用形成全鐵-TF,并與TFR1受體結(jié)合,在細(xì)胞內(nèi)吞作用下進(jìn)入核內(nèi)體。在偏酸性核內(nèi)體的環(huán)境中,F(xiàn)e3+與TF分離,同時(shí)前列腺蛋白(STEAP)將Fe3+還原為Fe2+,并被二價(jià)金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(DMT1)轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞質(zhì)中,然后釋放了Fe3+的TF與TFR1組成TF/TFR1復(fù)合物,通過(guò)胞吐作用回游到細(xì)胞表面。在細(xì)胞表面,轉(zhuǎn)鐵蛋白(TF)與受體TFR1分離,成為脫鐵-TF,然后再與Fe3+重新結(jié)合參與鐵循環(huán)。整個(gè)過(guò)程完成后TF和TFR1被循環(huán)利用,進(jìn)入細(xì)胞攝取鐵的下一個(gè)周期中。

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四、轉(zhuǎn)鐵蛋白在細(xì)胞培養(yǎng)中的重要作用

? ? 傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)基由基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加胎牛或小牛血清組成。血清是一種含有細(xì)胞生長(zhǎng)所需生長(zhǎng)因子的補(bǔ)充劑。而血清制品的定義不明確的性質(zhì)對(duì)于下游研究和治療應(yīng)用是不可取的,并且存在批次間差異。同時(shí),血清可能含有細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子和毒性因子,存在潛在毒性,血清的獲取成本高。血清由于成分不完全明確,給細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)化帶來(lái)困難,同時(shí)也給細(xì)胞表達(dá)目的產(chǎn)物純化等下游操作帶來(lái)困難。為了克服與血清相關(guān)的不一致性能,無(wú)血清培養(yǎng)基是絕對(duì)必要的。

? ? 細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基通常含有多種維生素、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、微量元素、激素、生長(zhǎng)因子以及結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白等,部分培養(yǎng)基包含動(dòng)物來(lái)源或微生物重組表達(dá)的細(xì)胞外基質(zhì)。

? ? 轉(zhuǎn)鐵蛋白對(duì)于確保足夠的細(xì)胞增殖和功能至關(guān)重要,對(duì)于絕大部分細(xì)胞系在無(wú)血清培養(yǎng)基中生長(zhǎng)是必需的,為絕大多數(shù)無(wú)血清培養(yǎng)基必需添加物組分,通過(guò)與轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(Transferrin Receptor, TFR) 相互作用,在無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)揮重要功能。轉(zhuǎn)鐵蛋白能與三價(jià)鐵離子可逆性結(jié)合,調(diào)節(jié)鐵離子轉(zhuǎn)運(yùn)及代謝,維持細(xì)胞內(nèi)的鐵以及鉻、錳、鎘、鎳等多種金屬離子的平衡穩(wěn)態(tài)。可維持細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖,有類(lèi)似于生長(zhǎng)因子的功能。而且,轉(zhuǎn)鐵蛋白也是一種重要的胞外抗氧化劑,可以避免細(xì)胞外環(huán)境中自由基的產(chǎn)生,防止細(xì)胞受到傷害。

? ? 總而言之,轉(zhuǎn)鐵蛋白是無(wú)血清培養(yǎng)體系中的重要成分,研究表明飽和鐵形態(tài)的轉(zhuǎn)鐵蛋白對(duì)于促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)是最有效的形態(tài)。對(duì)于雜交瘤,黏連細(xì)胞和懸浮細(xì)胞系,在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,應(yīng)保持培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)鐵蛋白濃度在0.5-100μg/ml。針對(duì)不同的細(xì)胞系,需要選擇最合適的濃度。

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五、植物源重組人轉(zhuǎn)鐵蛋白——禾創(chuàng)TMOsrhTF

禾創(chuàng)TMOsrhTF是一種來(lái)源于水稻胚乳細(xì)胞的重組人轉(zhuǎn)鐵蛋白,主要用于細(xì)胞培養(yǎng)。與天然提取來(lái)源的轉(zhuǎn)鐵蛋白相比,禾創(chuàng)TMOsrhTF避免了來(lái)自于人源或動(dòng)物源病毒及支原體污染的風(fēng)險(xiǎn)。產(chǎn)品詳情點(diǎn)擊鏈接

規(guī)格參數(shù)

來(lái)源:水稻種子

外觀:粉紅色至紅褐色或橘紅色粉末或晶體粉末

純度:≥95%(RP-HPLC)

pH值:6.0~8.0

內(nèi)毒素:≤1EU/mg

分子量:75kD

鐵飽和度:70%

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主要優(yōu)勢(shì)

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應(yīng)用案例

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圖1:與其他市售rhTF相比,在低血清測(cè)試體系下,禾創(chuàng)具有更佳的生物學(xué)活性

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圖2:禾創(chuàng)(右)和其他市售rhTF(左)在MSC細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)對(duì)比

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圖3:與未添加TF相比,禾創(chuàng)能明顯促進(jìn)細(xì)胞增殖,并且與其他市售rhTF相比,增殖效果相當(dāng)。

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無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)系列產(chǎn)品

OsrHSA——水稻重組人血清白蛋白

OsrhFN——水稻重組人纖維連接蛋白

OsrhbFGF——水稻重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子

OsrhVEGF——水稻重組人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

OsrhKGF——水稻重組人角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子

rhIGF-1 LR3——重組人類(lèi)胰島素生長(zhǎng)因子-1 LR3

rhEGF——重組人表皮生長(zhǎng)因子

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如您正在進(jìn)行無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的研究并遇到相關(guān)困擾,歡迎與禾元生物聯(lián)系。

技術(shù)支持QQ:2490959153

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參考文獻(xiàn)

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3. Rice-Evans C, Green E, Paganga G, Cooper C, Wrigglesworth J. Oxidised low density lipoproteins induce iron release from activated myoglobin. FEBS Lett 1993;326:177-182.

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